Общее микробное число для питьевой воды нормирование - Домашний мастер Dach-Master.ru
5 просмотров
Рейтинг статьи
1 звезда2 звезды3 звезды4 звезды5 звезд
Загрузка...

Общее микробное число для питьевой воды нормирование

Микрофлора воды. Оценка санитарного состояния воды. Методы определения микробного числа воды и выявление колиформных бактерий. Нормативы

В пресных водоёмах (реки, озёра) нормальными обитателями являются Micrococcus roseus и др. микрококки, Pseudomonas fluorescens, извитые формы (Sp. rubrum). В воду поступают сапрофитные микробы почвы: p. Azotobacter, p. Nitrobacter, p. Proteus, p. Pseudomonas, p. Spirillum и др. Микробы воды участвуют в самоочищении водоемов. Они расщепляют органические вещества и делают их пригодными для усвоения другими организмами. Они являются также пищей для раков и моллюсков. Больше всего микроорганизмов находится в придонных слоях, на дне, в прибрежной зоне (осенью и весной), т.к. на твердых частицах, в пористых материалах задерживаются питательные вещества. Таким образом, вода может быть фактором передачи инфекционных заболеваний (брюшного тифа и паратифа, дизентерии, сальмонеллёза, холеры, лептоспироза, полиомиелита, гепатита, туляремии).

Критерии санитарного состояния воды.

1. ОБЩАЯ МИКРОБНАЯ ЗАГРЯЗНЕННОСТЬ ВОДЫ.

2. КОЛИЧЕСТВО САНИТАРНО-ПОКАЗАТЕЛЬНЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ ВОДЫ. Санитарно-показательными микроорганизмами воды являются:

а) E. coli, Str. faecalis (свидетельствуют о свежем фекальном загрязнении);

б) p. Citrobacter, p. Enterobacter (свидетельствуют о сравнительно давнем фекальном загрязнении).

Для оценки санитарного состояния исследуют: 1) водопроводную воду; 2) дистиллированную воду; 3) воду открытых водоемов.

Определение ОМЧ водопроводной воды: а) берут не менее 500 мл воды с соблюдением асептики (обжигают краны, используют стерильную посуду); б) делают посев 10-кратных разведений воды (1:10, 1:100 и т.д.) в чашки Петри по 1 мл глубинным методом Коха на МПА (для бактерий) и на сусло-агар (для грибов); в) инкубируют при 37°С, 24 час для бактерий и при 24°С, 2-3 суток для грибов; г) считают число колоний (1 колония – 1 клетка); г) число колоний (1 колония=1 клетка) умножают на степень разведения и получают микробное число воды (т.к. объем посева — 1 мл, а ОМЧ воды – число микроорганизмов в 1 мл воды).

Определение микробного числа дистиллированной воды. 300 мл воды отбирают в стерильные бутылки из бюретки, которую обжигают ваткой, смоченной спиртом. Бутылки закрывают ватными пробками и бумажными колпачками. Дистиллированную воду для приготовления инъекционных растворов, отбирают в стерильные флаконы по 15-20 мл из ёмкостей, в которых проводится стерилизация. Посев и расчет производят так же, как и при исследовании водопроводной воды.

Определение микробного числа речной воды. 100 мл воды берут при помощи батометра с определенной глубины. Делают посевы 1,0; 0,1 и 0,001 мл так же, как и при исследовании водопроводной воды.

Определение коли-титра и коли-индекса. Разработаны стандарты определения этих показателей для водопроводной воды и воды артезианских скважин. Для воды открытых водоемов стандарты не разработаны и для ее анализа используют разные методы в зависимости от загрязнения воды.

Для определения коли-титра воды чаще используют двухфазный бродильный метод.

Первый этап– делают посев на среду Эйкмана (глюкозопептонная среда – ГПС) с поплавками для сбора газа и посевы ставят в термостат (инкубируют) при 43°C на 24 часа. Концентрированную среду Эйкмана используют для анализа водопроводной воды. Делают посев двух проб воды по 100 мл в колбы с 10 мл среды и десяти проб по 10 мл воды в пробирки с 1 мл среды. Таким образом, объем засеянной воды – 300 мл: 2 колбы по 100 мл и 10 пробирок по 10 мл.

Второй этап– делают пересевы на среду Эндо и РДА (розолово-дифференциальный агар) из тех колб и пробирок, где наблюдается рост. Признаки роста E. coli на среде Эйкмана — диффузное помутнение и образование газа. Посевы инкубируют при 37°C 24 часа.

Третий этап – просматривают посевы на среде Эндо и РДА. Признаки роста E. coli на среде Эндо — образование гладких колоний красного цвета, с металлическим блеском. Признаки роста E. coli на РДА — пожелтение среды, вспенивание конденсационной жидкости и разрывы в РДА.

Проводят микроскопическое подтверждение E. coli: из подозрительных колоний делают мазки и окрашивают по Граму; под микроскопом наблюдают грам «-» мелкие палочки.

Проводят биохимическое подтверждение E. coli — оксидазный тест на цитохромоксидазу. Если есть цитохромоксидаза — бумажка синеет в течение 1 минуты. E. coli — оксидазоотрицательная.

Для определения коли-индекса воды используют метод мембранных фильтров.

1. Воду пропускают через мембранный фильтр №3. Мембранные фильтры перед фильтрованием стерилизуют кипячением в дистиллированной воде.

Воду из водопроводной системы Москвы и Санкт-Петербурга и воду артезианских скважин фильтруют в объёме 500 мл, воду других городов – в объёме 333 мл.

2. Фильтры помещают на поверхность среды Эндо в чашку Петри.

3. Инкубируют при 37° C в течение суток и подсчитывают количество выросших колоний, типичных для E. coli.

4. Из 2-3 колоний красного цвета готовят мазки, окрашивают по Граму, а также ставят оксидазный тест. Если в мазках видны грам «-» мелкие палочки, которые являются оксидазоотрицательными, то результат считается положительным.

5. 2-3 такие колонии засевают в разведённую среду Эйкмана и инкубируют в течение суток при 37° C. Если в пробирках имеется газообразование, дают окончательный положительный ответ на наличие E. coli.

Коли – индекс рассчитывают по количеству красных колоний на фильтре. Например, на фильтре выросли 3 окрашенные колонии, а воды было 300 мл. Следовательно, в 100 мл – 1 клетка E. coli, а в 1000 мл – 10 клеток, т.е. коли-индекс равен 10. Исходя из этого значения коли-индекса, рассчитываем коли-титр: 1000/10 = 100. Если коли-индекс равен 5, то коли-титр равен 1000/5=200.

Микробное число водопроводной воды не должно превышать 50, а дистиллированной воды, используемой для приготовления лекарств, не должно превышать 10-15.

Микрофлора воздуха. Оценка санитарного состояния воздуха закрытых помещений. Методы определения микробного числа воздуха и санитарно-показательных микроорганизмов. Расчет омелянского.

В воздухе могут встречаться до 100 видов сапрофитных микроорганизмов: пигментообразующие бактерии (микрококки, жёлтая сарцина, палочка чудесной крови и др.), спорообразующие микробы (дрожжи, плесневые грибы, актиномицеты), споровые палочки (B. subtilis, B. megaterium, B. cereus), которые наиболее устойчивы к действию прямого солнечного света и высушивания.

В связи с этим воздух может быть фактором передачи ряда инфекций: гриппа, кори, скарлатины, дифтерии, туберкулёза, коклюша, стрептококковых, стафилококковых и менингококковых инфекций, ангины, оспы, лёгочная форма чумы и др.

Критерии оценки санитарного состояния воздуха закрытых помещений.

1. ОБЩАЯ МИКРОБНАЯ ЗАГРЯЗНЕННОСТЬ.

2. КОЛИЧЕСТВО САНИТАРНО-ПОКАЗАТЕЛЬНЫХ МИКРОБОВ ВОЗДУХА.

Cанитарно-показательными микробами воздуха закрытых помещений являются:

1) золотистый стафилококк — S. aureus;

2) a-зеленящий стрептококк — Str. viridans;

3) b-гемолитический стрептококк — Str. haemolyticus.

1. Седиментационный метод Коха — наиболее простой метод. Он используется только для ориентировочного анализа. Посев воздуха делают так: чашку Петри с определенной плотной питательной средой оставляют открытой в течение определённого времени и микробы оседают из воздуха на поверхность среды. Затем чашки Петри с посевом инкубируют в термостате и подсчитывают число колоний, зная, что 1 колония – 1 клетка. Микробное число воздуха или количество санитарно-показательных микробов подсчитывают, пользуясь правилом Омелянского: на поверхность питательной среды площадью 100 см 2 за 5 мин оседает столько микробов, сколько их содержится в 10 л воздуха.

2. Аспирационный метод Кротова — более точный количественный метод. Посев воздуха осуществляется с помощью аппарата Кротова. Прибор Кротова устроен так, что можно сделать посев определенного объема воздуха на различные среды.

Для определения общего количества сапрофитных бактерий пропускают 100 л воздуха и используют МПА.

Для определения количества санитарно-показательных микробов пропускают 250 л и используют желточно-солевой агар для стафилококка, среду Гарро (кровяной агар с генциановым фиолетовым) для стрептококков.

В каждом помещении делают посевы на 5-10 чашек Петри. Посевы на МПА, среде Гарро и желточно-солевом агаре инкубируют при 37°С, 24 часа, а затем выдерживают при комнатной температуре 24 часа. Посевы на среде Сабуро – при 22-28°С, 4 сут. После инкубации подсчитывают количество колоний и производят пересчет на 1 м 3 воздуха. Идентификацию стафилококка, выросшего на желточно-солевом агаре, проводят по специальным тестам.

Общее микробное число для питьевой воды нормирование

Цель работы: изучение методов оценки санитарнобактериологического состояния питьевой воды и воды из естественных водоемов.

Вода, используемая на предприятиях пищевой промышленности, должна отвечать требованиям, предъявляемым к питьевой воде действующими нормативными документами. Безопасность воды в эпидемиологическом отношении определяют по общему числу микроорганизмов и количеству бактерий группы кишечных палочек в ее определенном объеме.

Качество воды централизованных систем питьевого водоснабжения определяют в соответствии с санитарными правилами и нормами. Питьевая вода должна быть безопасна в эпидемиологическом и радиационном отношениях, безопасна по химическому составу и иметь благоприятные органолептические свойства (табл. 12.1).

Таблица 12.1. Безопасность питьевой воды в эпидемиологическом отношении (по микробиологическим и паразитологическим показателям) СанПиН 2.1.4.1074-01

Общее микробное число (ОМЧ)

Число КОЕ в 1 см 3

Термотолерантные колиформные бактерии

Число бактерий в 100 см 3

Читать еще:  Как заменить счетчик воды в квартире

Общие колиформные бактерии

Число бактерий в 100 см3

Число БОЕ* в 100 см 3

Споры сульфитредуцирующих бактерий

Число спор в 20 см 3

Число цист в 50 дм 3

* БОЕ — бляшкообразующие единицы.

12.1. Отбор проб и подготовка их к анализу

Воду для санитарно-бактериологического контроля отбирают в количестве 500 см 3 в бутылки, предварительно простерилизованные в бумажных пакетах, с ватно-марлевой пробкой, покрытой сверху бумажным колпачком.

Перед отбором пробы кран или край трубы обжигают зажженным ватным тампоном, пропитанным спиртом. Открывают кран и в течение 10-15 мин воду спускают, затем производят отбор пробы. Вода подлежит анализу не позже чем через 2 ч после отбора.

Пробы воды из открытых водоемов — колодцев, бассейнов, рек, озер — отбирают с помощью батометров, представляющих собой металлический каркас с массивным свинцовым дном — грузилом. В металлический каркас вставлена бутылка. Батометр погружают на заданную глубину и открывают бутылку, потягивая за веревку, привязанную к пробке. После наполнения бутылки батометр извлекают и закрывают ее стерильной пробкой.

Пробы хлорированной воды берут во флаконы с дехлоратором, так как под действием хлора микробы в воде погибают. В качестве дехлоратора используют серноватистый натрий из расчета 10 мг на 500 см исследуемой воды.

К отобранным пробам воды прилагают сопроводительный документ с указанием соответствующих данных. Доставку проб питьевой воды осуществляют в контейнерах-холодильниках при температуре от 4 до 10 °С.

12.2. Определение общего микробного числа воды

Общее микробное число (ОМЧ) — это количество мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов, образующих колонии на мясопептонном агаре при посеве 1 см 3 воды с последующей инкубацией посевов при температуре 37±0,5 °С в течение 48 ч. ОМЧ должно быть не более 50 КОЕ/см 3 .

В зависимости от степени предполагаемого загрязнения производят посев не менее двух различных объемов воды, выбранных с таким расчетом, чтобы на чашках вырастало от 30 до 300 колоний. Водопроводную и артезианскую воду засевают в неразведенном виде по 1 см 3 . При бактериологическом исследовании загрязненных вод делают посевы разведенной воды. Разведения готовят так, как указано в разделе 8.3.

Из исследуемого образца и из пробирок с его разведениями в соответствии со степенью предполагаемого микробного загрязнения отбирают по 1 см 3 , вносят в стерильные чашки Петри и заливают 10-12 см расплавленного и остуженного до температуры 45 °С мясопептонного агара. Круговыми движениями руки, вращая чашки по горизонтальной поверхности стола, распределяют их содержимое равномерным слоем по всей площади дна. После застывания агара чашки с посевами помещают на 24 ч в термостат при температуре 37 °С. После инкубации подсчитывают число выросших колоний.

Определение микробного числа указанным методом позволяет выявить лишь мезофильные аэробные и факультативно-анаэробные микроорганизмы.

12.3. Определение содержания колиформных бактерий в воде

С эпидемиологической точки зрения особенно важным является обнаружение в воде патогенных микроорганизмов — возбудителей кишечных инфекций (брюшного тифа, дизентерии, холеры и др.) Однако в связи с большой трудностью обнаружения патогенных микроорганизмов при бактериологических анализах ограничиваются определением так называемых санитарно-показательных микроорганизмов (СПМ). К санитарно-показательным относят микроорганизмы, постоянно находящиеся в естественных полостях человека или животных. Присутствие СПМ в различных объектах внешней среды является индикатором их загрязнения человеком. Чем больше СПМ во внешней среде, тем более вероятным становится присутствие специфических возбудителей инфекционных заболеваний.

В качестве СПМ наибольшее значение имеют бактерии группы кишечных палочек (БГКП). К группе кишечных палочек относят колиформные бактерии родов Escherichia, Enterobacter, Citrobacter, Klebsiella, Serratia.

При определении количества СПМ в воде используют следующие характеристики:

• коли-титр — наименьший объем воды, в котором обнаружена одна кишечная палочка. Для питьевой воды, прошедшей очистку, титр кишечной палочки должен быть не менее 300 см 3 ;

• коли-индекс — количество кишечных палочек в 1 дм 3 воды. Коли-индекс для питьевой воды должен быть не более 3.

Колиформные бактерии определяют в воде методом мембранных фильтров или бродильным методом.

Бродильный метод. Сущность бродильного метода заключается в посеве определенных объемов исследуемой воды, инкубации

посевов при температуре 37 °С в средах накопления с последующим высевом на среду Эндо, дифференциацией выросших колоний и определением наиболее вероятного числа БГКП в 1 дм 3 воды.

При исследовании воды централизованного водоснабжения исследуемый материал дважды засевают в три объема: 100, 10 и 1 см 3 . Для исследования речной, озерной, прудовой воды готовят десятикратные разведения 1:10, 1:100, 1:1000 и засевают еще 10 см 3 и 1 см 3 без разведения. Посев воды производят в бродильные сосуды (колбы, бутылки, пробирки с поплавками), заполненные глюкозопептонной средой Эйкмана. Посевы инкубируют в термостате при температуре 37 °С в течение 24 ч.

Обработка результатов анализа. По окончании инкубации посевы просматривают и делают следующие выводы:

а) при отсутствии газообразования и изменения цвета среды дают отрицательный ответ на наличие БГКП в исследуемом объеме воды, дающим право закончить исследование через 24 ч;

б) при образовании кислоты и газа производится высев материала из бродильных сосудов на среду Эндо. Высев делается бактериологической петлей густым штрихом для получения изолированных колоний. Чашки с посевами инкубируют при температуре 37 °С в течение 24 ч. После инкубации посевы просматривают. Отсутствие на среде Эндо характерных для кишечных палочек колоний дает основание на выдачу отрицательного ответа и окончание исследования;

в) при обнаружении на среде Эндо лактозоположительных темно-красных колоний, с металлическим блеском или без него, необходимо установить принадлежность выросших микроорганизмов к семейству кишечных бактерий. С этой целью производится микроскопирование препарата из колоний и постановка оксидазного теста.

Оксидазный тест предложен для дифференциации бактерий семейства Enterobacteriaceae от грамотрицательных бактерий семейства Pseudomonodaceae и других водных сапрофитов, которые, в отличие от кишечных бактерий, вырабатывают фермент оксидазу.

Для постановки оксидазного теста со среды Эндо снимают петлей по 2-3 колонии каждого типа. Микробную массу наносят штрихом на фильтровальную бумагу, смоченную специальным реактивом (30 г α-д-нафтола растворяют в 2,5 см 3 этанола, прибавляют 7,5 см 3 дистиллированной воды и 40 мг диметил-парафенилендиамина. Раствор готовят непосредственно перед определением).

При отрицательном результате оксидазного теста бумага при контакте с колонией цвета не меняет. Если же бумага синеет в течение 1 мин при контакте с колонией, то оксидазный тест считают положительным.

Наличие в препарате грамотрицательных неспорообразующих палочек, не обладающих оксидазной активностью, позволяет немедленно дать ответ о наличии в воде БГКП.

При обнаружении на среде Эндо розовых и бесцветных колоний ведут подсчет и пересевают 2-3 изолированные колонии каждого типа в глюкозо-пептонную среду Эйкмана. Посевы инкубируют при температуре 37 °С в течение 3-4 ч. При образовании кислоты (изменение цвета среды) и газа, накапливающегося в поплавке, результат считается положительным, при отсутствии кислото- и газообразования — отрицательным.

После проведения анализа записывают в лабораторный журнал окончательные результаты (положительные и отрицательные) по каждому засеянному объему и определяют коли-титр и коли-индекс.

Метод мембранных фильтров. Сущность метода заключается в концентрировании бактерий из определенного объема воды на мембранных фильтрах с последующим выращиванием их на среде Эндо при температуре 37 °С, дифференцированием выросших колоний и подсчетом количества БГКП в 1 см 3 воды.

Подготовка мембранных фильтров. Для фильтрования воды отбирают мембранные фильтры № 3, помещают их в подогретую до температуры 80 °С дистиллированную воду и ставят на небольшой огонь для кипячения. Кипячение проводят трижды по 10 мин. После первого и второго кипячения воду сливают, а после третьего фильтры оставляют в воде до употребления.

Подготовка фильтровального аппарата. Фильтровальный аппарат стерилизуют в автоклаве или протирают ватным тампоном, смоченным в спирте, и обжигают в целях стерилизации. На столик фильтровального аппарата стерильным пинцетом помещают мембранный фильтр. Во избежание повреждения фильтра под него подкладывают кружок стерильной фильтровальной бумаги. На фильтровальный столик с положенными на него фильтрами устанавливают и закрепляют верхнюю часть прибора — воронку (рис. 12.1).

Рис. 12.1. Определение количества микроорганизмов методом мембранных фильтров

Фильтрование воды и выращивание микроорганизмов. В воронку фильтровального аппарата стерильно наливают исследуемый объем воды и с помощью водоструйного насоса создают вакуум в приемном сосуде. При анализе питьевой воды, поступающей в водопроводную сеть, необходимо брать объем не менее 333 см 3 . По окончании фильтрования мембранный фильтр профламбированным пинцетом переносят на поверхность питательной среды Эндо в чашки Петри. В настоящее время выпускают фильтры, пропитанные соответствующими питательными средами. Посевы инкубируют в термостате при температуре 37 °С в течение 18-24 ч.

Обработка результатов анализа. По окончании инкубации посевы просматривают и делают следующие выводы:

а) отсутствие микробного роста на фильтрах или обнаружение на них колоний, не характерных для БГКП, позволяет закончить исследования на этом этапе анализа с выдачей отрицательного результата на присутствие БГКП в анализируемом объеме воды;

б) при обнаружении на фильтре колоний, характерных для БГКП, исследование продолжают. Из нескольких колоний каждого типа готовят мазки, окрашивают их по Граму и микроскопируют. Отсутствие в мазках мелких грамотрицательных неспороносных палочек является основанием для прекращения анализа с выдачей отрицательного результата на присутствие БГКП в исследуемом объеме воды;

Читать еще:  Меню низким содержанием углеводов

в) при наличии в мазках грамотрицательных палочек, морфологически сходных с кишечными, ставится оксидазная проба. При обнаружении на мембранных фильтрах однотипных лактозоположительных колоний (темно-красных с металлическим блеском или без него), не вырабатывающих оксидазы, анализ воды на этом этапе заканчивают и подсчитывают число выросших на мембранном фильтре колоний кишечных палочек. Результат выражают в виде коли- индекса в пересчете на 1 дм 3 воды;

г) при обнаружении на мембранных фильтрах розовых и бесцветных колоний подсчитывают их число и пересевают 2-3 изолированные колонии каждого типа в глюкозо-пептонную среду Эйкмана. После инкубации в течение 3-4 ч при температуре 37 °С отмечают изменение цвета среды за счет образования кислоты и накопления газа в поплавке. В этом случае результат считается положительным. Если изменений в среде нет, то дают отрицательный результат на присутствие БГКП.

Пример определения колииндекса: профильтровано три объема воды по 100 см 3 . На первом и втором фильтрах выросло по три колонии, на третьем — девять колоний. Всего выросло пятнадцать колоний. Таким образом, колииндекс исследуемого образца воды равен: (1000 х 15):300 = 50. Колииндекс переводится в колититр следующим образом: 1000:50 = 20.

Контрольные вопросы

1. Какие Вы знаете показатели эпидемиологической безопасности питьевой воды?

2. Что такое общее микробное число, колититр и колииндекс?

3. Какие роды микроорганизмов входят в БГКП?

4. Какими методами определяют колиформные бактерии?

5. Каковы основные критерии, по которым устанавливают присутствие колиформных бактерий в питьевой воде?

6. С какой целью проводят тест на оксидазу?

Нормирование качества воды

В соответствии с санитарными правилами и нормами СанПиН 2.1.4.1074-01. 2.1.4. Питьевая водапри любом типе водоисточника, способе обработки и конструктивных особенностях водопроводной сети должна отвечать ряду гигиенических требований:

ü быть безопасной в эпидемическом и радиационном отношении;

ü безвредной по химическому составу;

ü иметь благоприятные органолептические свойства.

Выполнение этих требований достигается при соответствии показателей качества воды установленным нормативам. Подкачеством воды понимается характеристика её состава и свойств, определяющая пригодность для конкретных видов водопользования. Показатели качества – признаки, по которым производится оценка качества воды.

По санитарному признаку устанавливаются микробиологические и паразитологические показатели.Безопасность воды в эпидемическом отношении определяется косвенными показателями:

ü степенью общего бактериального загрязнения (числом микроорганизмов); содержанием бактерий группы кишечной палочки в единице объёма.

Самым общим санитарным показателем является наличие в воде определённого количества микроорганизмов в единице объёма. Этот показатель обычно определяют микробиологическими методами путём высева небольшого объёма исследуемого образца воды (0,1 мл) в стерильные чашки Петри на плотную питательную среду и инкубации пробы в течение суток в термостате при температуре 28–30 0 С. Содержащиеся в воде микроорганизмы размножаются на плотной питательной среде, и из каждой клетки образуются видимые невооружённым глазом колонии. Подсчитанное число микроорганизмов, соответствующее числу выросших микробных колоний, в расчёте на 1 мл исследуемой воды называется общим микробным числом.

С точки зрения предотвращения инфекционных болезней важно выявить наличие в природной воде патогенных микроорганизмов. Для оценки вероятности заражения воды возбудителями холеры, дизентерии, брюшного тифа и т. п. используют кишечную палочку (E. сoli) – индикатор фекального загрязнения. Для количественной характеристики содержания кишечной палочки используют показатели: коли-индекс, коли-титр (фекальные коли-формы), коли-фаги. Коли-индекс – это количество кишечных палочек в 1 л исследуемой воды. Коли-титр– это величина, обратная коли-индексу, т. е. наименьшее количество воды (в мл), в котором содержится хотя бы одна кишечная палочка. Коли-титр выражают в безразмерных единицах (например, если коли-титр равен 300, значит, в 300 мл воды содержится одна кишечная палочка). Коли-титр применяется для характеристики воды загрязнённых водоёмов, куда могли попасть сточные воды. Для перевода коли-титра в коли-индекс надо число 1000 разделить на величину коли-титра. Питьевая вода должна иметь микробное число не более 100, коли-индекс не более 3, коли-титр не менее 300.

Нормируется также паразитологический показатель: в 50 л воды должны отсутствовать цисты лямблий (патогенных простейших).

Показатели радиоактивного загрязнения воды– нормируется суммарная объёмная активность — и α-излучателей. При значениях активности α- и излучателей ниже 0,2 и 1,0 Бк/кг соответственно дальнейшее исследование воды не обязательно. В случае превышения нормативов проводится дополнительный контроль радионуклидного состава загрязнений в соответствии с действующими нормами радиационной безопасности НРБ-99/2009.

Токсикологические показатели воды, характеризующие безвредность её химического состава, определяются содержанием химических веществ, которое не должно превышать установленных нормативов. Показатели безвредности химического состава питьевой воды включают нормы для веществ:

1) встречающихся в природных водах на территории РФ, а также веществ антропогенного происхождения, получивших глобальное распространение;

2) поступающих в виде реагентов и образующихся в воде в процессе её обработки в системе водоснабжения;

3) появляющихся в результате промышленного и сельскохозяйственного загрязнения водоисточников.

К первой группе отнесены неорганические компоненты: алюминий, барий, бериллий, бор, кадмий, молибден, мышьяк, никель, нитраты, свинец, селен, стронций, фториды, ртуть, хром, цианиды. В числе органических компонентов нормируются нефтепродукты (суммарно), поверхностно-активные вещества (ПАВ) анионоактивные и некоторые пестициды: гамма-ГХЦГ(линдан), ДДТ, 2,4-Д. К веществам второй группы относятся: хлор, хлороформ, формальдегид, полиакриламид, алюминий- и железосодержащие коагулянты.

При обнаружении в питьевой воде нескольких химических веществ, относящихся к I и II классам опасности и нормируемых по санитарнотоксикологическому признаку вредности, сумма отношений обнаруженных концентраций каждого из них в воде к величине его ПДК не должна быть больше 1 (так же, как и в воздухе) (табл.5).

Основные показатели при исследовании воды. Общее микробное число для питьевой воды нормирование

Комментарии к таблице. Оценивая количество ОКБ и ТКБ в 100 см 3 воды, следует анализировать не менее трех объемов воды (по 100 см 3 каждый). При оценке ОКБ и ОМЧ превышение норматива не допускается в 95% проб, отбираемых в течение года. Колифаги определяют только в системах водоснабжения из поверхностных источников перед подачей воды в распределительную сеть, то же касается и наличия цист лямблий. Содержание спор сульфитредуцирующих клостридий определяют только при оценке эффективности технологии обработки воды. В случае обнаружения ТКБ, ОКБ, колифагов или хотя бы одного из указанных показателей вновь проводят повторное экстренное исследование воды на ТКБ, ОКБ и колифаги. Параллельно проводят исследование воды на хлориды, аммонийный азот, нитраты и нитриты. Если и в повторно взятой пробе выявляются ОКБ более двух в 100 см 3 и/или ТКБ, и/или колифаги, то проводят исследование на патогенные бактерии кишечной группы и/или энтеровирусы. Такое же исследование на патогенные энтеробактерии и энтеровирусы проводят по эпидемиологическим показаниям по решению территориальных центров Роспотребнадзора.

Термотолерантные колиформные бактерии (ТКБ) входят в состав ОКБ и обладают всеми их признаками, но, в отличие от них, способны ферментировать лактозу до кислоты, альдегида и газа при температуре +44 °С в течение 24 ч. Таким образом, ТКБ отличаются от ОКБ способностью ферментировать лактозу до кислоты и газа при более высокой температуре.

Определяемые показатели, количество и периодичность исследований зависят от типа источника водоснабжения, численности населения, обеспечиваемого водой из данной системы водоснабжения. Эти данные приведены в СанПиН 2.1.4.1074–01 . В методических указаниях по санитарно-микробиологическому анализу питьевой воды (МУК 4.2.1018–01 Министерства здравоохранения РФ ) регламентированы методы санитарно — микробиологического контроля качества питьевой воды.

Общее число микроорганизмов — это общее число видимых при двукратном увеличении мезофильных (имеющих температурный оптимум +37 °С) аэробных и факультативно анаэробных микроорганизмов (МАФАнМ), которые способны образовывать колонии на питательном агаре при температуре +37 °С в течение 24 ч. Для выявления этого показателя в стерильную чашку Петри вносят 1 мл воды и заливают расплавленным (температура не выше +50 °С) мясопептонным агаром, а через сутки подсчитывают количество выросших колоний.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОКБ И ТКБ МЕТОДОМ МЕМБРАННЫХ ФИЛЬТРОВ

Метод основан на фильтровании определенных объемов воды через мембранные фильтры. Для этих целей используют фильтры с диаметром пор 0,45 мкм и размером 35 или 47 мм в диаметре (отечественные фильтры «Владипор» МФАС–С–1, МФАС–С–2, МФАС–МА (№ 4–6) или зарубежные — ISO 9000 или EN 29000). Мембранные фильтры подготавливают к анализу в соответствии с инструкциями завода — изготовителя.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОКБ И ТКБ ТИТРАЦИОННЫМ МЕТОДОМ

Метод основан на накоплении бактерий после посева определенных объемов воды в жидкие питательные среды, с последующим пересевом на дифференциальную плотную среду с лактозой и идентификации колоний по культуральным и биохимическим тестам. При исследовании питьевой воды качественным методом (текущий санэпиднадзор) засевают три объема по 100 см 3 . При исследовании воды с целью количественного определения ОКБ и ТКБ (повторный анализ) засевают соответственно 100, 10 и 1 см 3 — по три объема каждой серии.

САНИТАРНО-МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ПОЧВЫ

Читать еще:  Защита водоразборной колонки от замерзания своими руками

Почва дает приют разнообразным микроорганизмам. Так, количество только бактерий в почве достигает 10 млрд. клеток в 1 г. Микроорганизмы участвуют в почвообразовании и самоочищении почвы, в кругооборота в природе азота, углерода, и других элементов. В ней кроме бактерий обитают грибы, простейшие и лишайники представляющие собой симбиоз грибов с цианобактериями. На поверхности почвы микроорганизмов относительно мало из-за губительного действия УФ-лучей, высушивания и других факторов. Пахотный слой почвы толщиной 10–15 см содержит наибольшее число микроорганизмов. По мере углубления количество микроорганизмов уменьшается вплоть до их исчезновения на глубине 3–4 м. Состав микрофлоры почвы зависит от ее типа и состояния, состава растительности, температуры, влажности и т.д. Большинство почвенных микроорганизмов способны развиваться при нейтральном рН, высокой относительной влажности, температуре от 25 до 45 °С.

В почве живут спорообразующие палочки родов Bacillus иCloslridium. Непатогенные бациллы(Вас. megaterium, Вас. subtilis и др.). наряду с псевдомонадами, протеем и некоторыми другими бактериями являются аммонифицирующими, составляя группу гнилостных бактерий, осуществляющих минерализацию органических веществ. Патогенные спорообразующие палочки (возбудители сибирской язвы, ботулизма, столбняка, газовой гангрены) способны длительно сохраняться, а некоторые даже размножаться в почве (Clostridium botulinum ). Почва является также местом обитания азотфиксирующих бактерий, усваивающих молекулярный азот(Azotobacter, Azomonas, Mycobacterium и др.). Азотфиксирующие разновидности цианобактерий, или сине-зеленых водорослей, применяют для повышения плодородия рисовых полей.

Представители семейства кишечных бактерий (сем. Enterobacteriaceae) — кишечная палочка, возбудители брюшного тифа, сальмонеллезов и дизентерии, попав в почву с фекалиями, отмирают. В чистых почвах кишечная палочка и протей встречаются редко; Обнаружение бактерий группы кишечной палочки (колиформных бактерий) в значительных количествах является показателем загрязнения почвы фекалиями человека и животных и свидетельствует об ее санитарно-эпидемиологическом неблагополучии из-за возможности передачи возбудителей кишечных инфекций. Количество простейших в почве колеблется от 500 до 500 000 на 1 г почвы. Питаясь бактериями и органическими остатками, простейшие вызывают изменения в составе органических веществ почвы. В почве находятся также многочисленные грибы, токсины которых, накапливаясь в продуктах питания человека, вызывают интоксикации — микотоксикозы и афлатоксикозы.

Результаты исследования почв учитывают при определении и прогнозе степени их опасности для здоровья и условий проживания населения в населенных пунктах (по эпидемиологическим показаниям), профилактике инфекционной и неинфекционной заболеваемости (предупредительный санитарный надзор), текущем санитарном контроле за объектами, прямо или косвенно воздействующими на окружающую среду.

При проведении текущего санитарного надзора за состоянием почвы ограничиваются кратким санитарно-микробиологическим анализом, указывающим на наличие и степень фекального загрязнения. Показатели, включенные в эту группу, также характеризуют процессы самоочищения почвы от загрязнителей органической природы и энтеробактерий. Полный санитарно-микробиологический анализ почвы проводят в форме предупредительного санитарного надзора. Воздействие химических поллютантов на биогеоценоз предполагает исследование их бактерицидного действия на почвенную микробиоту, как следствие: изменение сообщества почвенных микроорганизмов, ферментативной активности почвы. По эпидемическим показаниям проводят индикацию патогенной микробиоты.

В лаборатории из 5 точечных проб почвы, взятых с одного участка, готовят усредненную пробу, тщательно перемешивая и растирая в стерильной фарфоровой чашке резиновым пестиком в течение 5 мин. Посторонние примеси (корни растений, камни, щепки) удаляют путем просеивания почвы через сито, которое предварительно протирают ватным тампоном, смоченным 96% этиловым спиртом. Из усредненной пробы отбирают навески (от 1 до 50–55 г в зависимости от перечня определяемых показателей) и готовят суспензию 1:10 на стерильной водопроводной воде (10 г почвы на 90 см 3 воды). Для десорбции микроорганизмов с поверхности почвенных частиц приготовленную почвенную суспензию встряхивают в течение 3 мин на мешалке механического диспергатора. После отстаивания суспензии в течение 30 с, готовят последовательные 10-кратные разведения почвы до концентрации 10 -4 –10 -5 г/см 3 .

Оценку результатов санитарно-микробиологического исследования почв проводят путем сопоставления данных, полученных на опытных и контрольных участках почв одинакового состава, расположенных в непосредственной территориальной близости. Схемы оценки санитарного состояния почвы на основании отдельных санитарно-микробиологических критериев представлены в МУ № 14446–76 (табл. 2).

Таблица 2. Схема оценки санитарного состояния почвы по микробиологическим показателям (по МУ№ 1446-76)

Исследование бутилированной воды различных торговых марок на общую микробную обсемененность

Дата публикации: 19.11.2018 2018-11-19

Статья просмотрена: 147 раз

Библиографическое описание:

Рафикова Л. М., Миянова А. Р., Азильгареева К. Р. Исследование бутилированной воды различных торговых марок на общую микробную обсемененность // Молодой ученый. — 2018. — №46. — С. 90-92. — URL https://moluch.ru/archive/232/53862/ (дата обращения: 13.11.2019).

Проведено исследование общей обсемененности бутилированной воды шести различных торговых марок. Был произведен подсчет количества колоний микроорганизмов, определен характер роста на различных средах с момента открытия бутылей воды и повторным исследованием в 1, 3, 7 день со дня вскрытия.

Ключевые слова: обсемененность, питьевая вода, колонии.

Цель работы: изучить общее микробное число (ОМЧ) бутилированной питьевой воды различных торговых марок и оценить скорость обсемененности воды с момента ее открытия.

Материалы иметоды: Оценка качества воды производится комплексно: по санитарно-микробиологическим показателям с учетом органолептических и химических данных и регламентируется соответствующими ГОСТами.

При оценке питьевой воды руководствуются основным требованием: она не должна содержать патогенных бактерий и вирусов [2]. При оценке ОМЧ воды исходят из того, чтобы в 1 мл содержалось не более 50 колоний.

Данное исследование проводилось на базе лаборатории кафедры микробиологии, вирусологии БГМУ, г. Уфа. Анализ микробной обсемененности бутилированной воды проводили в течение 7 дней. Для исследования было взято шесть образцов воды 6 различных торговых марок:

1— «Красный ключ», 2—«Красноусольская», 3—«Святой источник», 4—«Aquantika», 5—«Evian», 6—«Bon Aqua».

Перед посевом воду тщательно перемешивали, так как некоторые виды микроорганизмов имеют свойство оседать. Края емкости так же обеззараживали при помощи спиртового тампона. На используемых пробирках и чашках обозначили номер пробы и дату посева. Перед каждым отбором новой порции воды для анализа мы перемешивали пробу стерильной пипеткой [1]. Общее количество бактерий в бутилированной воде мы определили путём посева 1 мл воды в стерильные чашки Петри, в которые затем последовательно прилили остуженные до 42–45 ˚С питательный агар, среду Эндо, среду Сабуро. В итоге мы получили 18 чашек Петри: чашки с питательным агаром и средой Эндо после застывания поместили вверх дном в термостат и инкубировали в течение 24±2 часов при температуре 37±1 ˚С, а затем в течение 24±2 часов при температуре 20–23 ˚С на свету, чашки со средой сабуро оставили на столе при комнатной температуре на 5 суток. Затем производили подсчёт выросших колоний микробов и изучали их морфологические и культуральные свойства. Идентификацию микроорганизмов проводили бактериоскопическим методом с предварительным приготовлением мазков и окрашиванием их методом по Граму и последующим использованием иммерсионной микроскопии. Проведённое лабораторное исследование повторяли по прошествии трёх и семи дней после вскрытия бутылей.

Результаты иобсуждение. После посева на Питательный агар (ПА) было проведено исследование выросших колоний. Результат первого дня был отрицательным. На третий день был обнаружен сплошной рост колоний мутного цвета в пробах 2 и 5. На седьмой день был отмечен равномерный рост белых мелких изолированных колоний в количестве около 440, в последующих пробах 450, 330, 390, 550, 340 соответственно (Табл 1). Колонии, проросшие на питательном агаре, были подвергнуты микроскопированию. Мазки окрашивали по Граму. Под микроскопом были обнаружены грамположительные и грамотрицательные палочки (Рис 1,A).

На средах Эндо, используемых для дифференциальной диагностики кишечной группы микроорганизмов, на первый и третий день роста не наблюдалось. На седьмой день в первой пробе проросла гладкая, блестящая единичная колония ярко-розового цвета. Во второй и последующих пробах был обнаружен рост изолированных колоний бледно-розового цвета в количестве 11, 10, 14, 15, 27 соответственно (Табл 2). Проросшие колонии также подверглись микроскопированию. Под микроскопом в препаратах были обнаружены грамположительные и грамотрицательные палочки (Рис 1, B).

На средах Сабуро на первый день отмечался сплошной рост колоний в первой, четвёртой и пятой пробах. В чашках под номером 2,3 и 6 отмечался рост только одной колонии, а в чашке под номером 5 проросла 171 колония различных размеров. На третий день в первой и второй пробах наблюдался рост только одной колонии, в третей пробе- одна крупная колония и множество мелких изолированных, в четвёртой-большое количество мелких изолированных колоний, в пятой- 40 крупных изолированных колоний и также сплошной рост, в шестой-большое количество мелких изолированных колоний,20 крупных изолированных. На седьмой день наблюдался рост одной крупной колонии и 240 мелких изолированных, во второй- 3 крупных колоний, в третей- 2 мелких изолированных, в четвёртой- только одна колония среднего размера, в пятой- 395 колоний различного размера, в шестой отмечался сплошной рост колоний (Табл. 3). Проросшие колонии подверглись микроскопированию. Под микроскопом были обнаружены грамположительные и грамотрицательные палочки и кокки, актиномицеты (Рис 1, C).

Результаты подсчета колоний представлены в таблицах.

ОМЧ на среде Питательный агар

Ссылка на основную публикацию
ВсеИнструменты
Adblock
detector